Isaac Clarke - główny bohater gry, po ucieczce ze stacji kosmicznej The Sprawl spędza trzy lata w ukryciu na New Horizons Lunar Colony (księżyc Ziemi). Ellie namawia go, by wziął udział w misji ocalenia ludzkości, która wiązała się ze zniszczeniem pozostałych Markerów, ten jednak odmawia, a sama podejmuje się tego zadania. Po pewnym czasie dostaje wiadomość od kapitana Roberta Norton'a i sierżanta John'a Carver'a, iż Ellie jest w niebezpieczeństwie i za ich namową rusza jej na ratunek, przez co zostaje uwikłany w misję odkrycia tejemnicy Znaku na planecie skutej lodem zwanej Tau Volantis. Pomimo zniszczenia jednej z kopi Znaku na The Sprawl wciąż zdaje się wciąż odczuwać skutki jego oddziaływania.

Ellie Langford - przed wybuchem plagi nekromorfów była pilotem ciężkiego sprzętu na Sprawl. Po ucieczce z tej stacji wraz z Isaaciem, którego uratowała przed śmiercią, rodzą się w niej chęci znalezienia sposobó na powstrzymanie nekromorfów. Chce, by Isaac towarzyszył jej w tym, aczkolwiek nie zgadza się on na to, co mogło być przyczyną rozpadnięcia się ich związku. Dołącza więc do EarthGov, gdzie poznaje kapitana Roberta Norton'a (z którym rozpoczyna nowy związek) i sierżanta John'a Carver'a. W końcu udaje się jej odnaleźć skąd pochodzi źródło sygnału Markera. Prawdopodobnie jest to planeta Tou Volantis, którą uznaje za miejsce stworzenia Znaku, dlatego kieruje się tam, uprzednio prosząc, by Norton i Carver zwerbowali Isaaca Clarke'a do pomocy. Po wyruszeniu Ellie na Tau Volantis nie ma z nią żadnego kontaktu.

John Carver - oficer odziału Earth Defense Force zwerbowany przez kapitana Roberta na planecie Uxor, , gdy ta dotknięta została plagą nekromorfów po tym jak Jacob Danik uwolnił tam Znak, przez co stracił żonę i dziecko. Podczas gdy Ellie znajduje sygnał Znaku na Tou Volantis wraz z Nortonem zostaje wysłany, by odnaleźć Isaaca Clarke'a i zwerbować go do pomocy w ich misji. Carver, zupełnie jak Isaac, pod wpływem Znaku zaczyna mieć halucynacje, w których widzi swoich bliskich. Jest drugą grywalną postacią, którą możemy pokierować w trybie kooperacji.

Robert Norton - kapitan EarthGov na statku USM Eudora na planecie Uxor werbuje sierżanta John'a Carvera. Poznaje Ellie, z którą następnie tworzy związek i za jej namową dołącza do misji powstrzymania plagi nekromorfów. Przed udaniem się Ellie na Tou Volantis prosi Nortona, by odnalazł Isaaca, którego umiejętności będę niezbędne w ich misji. Niestety nie jest on zbyt bardzo zaangażowany w misję zniszczenia Znaku, co przeradza się na konfilkt w całej drużynie, dodatkowo zdaje się budzić niechęć do Clarke'a z racji iż był on kiedyś związany z Ellie.

Jacob Danik - główny przeciwnik Isaac'a Clarke'a, który za wszelką cenę stara się przeszkodzić mu i jego drużynie w misji na Tou Volantis. Jest liderem grupy kościoła Unitologów zwanej The Circle. Zdecydowanie sprzeciwia się EarthGov, twierdząc że dopuszcza się herezji wykorzystując Znakido własnych celów. Jego formą sprzeciwu jest zniszczenie wszystkiego za pomocą nekromorfów, co przyczynić się ma, według jego religi do stworzenia lepszego świata. Umożliwić to mają mu Znaki, dzięki którym rozpocznie proces Konwergencji, pomóc mu w tym ma tajemnica skrywana na Tou Volantis,

Austin Buckell - członek załogi Ellie w misji poszukiwaniu sposobu na zgładzenie Znaku, posiada dużą wiedzę na temat walki z nekromorfami, a także Sovereign Colonies Armed Forces (wojskową oragnizacją)

Jennifer Santos - członek załogi Ellie w misji poszukiwaniu sposobu na zgładzenie Znaku, naukowiec, jej wiedza okazuje się być nieoceniona w powodzeniu misji na Tou Volantis.